产品货号：
YT974
中文名称：
pET-Dual-N-GST-PreScission质粒
英文名称：
pET-Dual-N-GST-PreScission Plasmid
产品规格：
1μg|100μg
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
pET-Dual-N-GST-PreScission是一种用于在大肠杆菌中高效共表达两种目的蛋白的质粒，其中一种可以带上GST标签(Glutathione S-transferase tag,GST tag)并且GST标签后有PreScission蛋白酶的酶切位点。本质粒包含两个多克隆位点(MCS)，每个多克隆位点前都有一个T7启动子/lac操作子和一个核糖体结合位点(rbs)，因此都可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白的表达。本质粒为氨苄青霉素抗性。
在共表达两个蛋白的复合物时，通常宜把较难表达的基因克隆到第一个多克隆位点，宜把较易表达的基因克隆到第二个多克隆位点。这样通过GST柱纯化，可分离纯化获得带有GST标签的蛋白复合物。本质粒的N端GST标签与第一个多克隆位点之间有PreScission蛋白酶识别的八肽序列LEVLFQGP，对应核酸序列为CTGGAAGTTCTGTTCCAGGGGCCC，配合使用我司生产的PreScission Protease(货号：YT982)4℃酶切过夜，第二天收集穿柱液即可获得蛋白复合物，这为后续进行蛋白复合物的功能检测、蛋白结晶等工作带来了极大的便利。PreScission蛋白酶酶切发生在八肽序列的Q和G之间，因此在酶切去除GST标签的时候会在目的蛋白的N端留下两个额外的氨基酸残基GP。当然，本质粒也可以只在第一个多克隆位点插入目的基因，这样就会仅表达一个含有N端GST标签和PreScission识别位点的目的蛋白。
pET-Dual-N-GST-PreScission质粒的主要信息如下：
pET-Dual-N-GST-PreScission质粒(6065bp)的图谱如下：
pET-Dual-N-GST质粒中推荐使用的测序引物序列如下：
MCS1-N Primer(626-647):5′-GCTATCCCACAAATTGATAAGT-3′
MCS1-C Primer(853-834):5′-GATTATGCGGCCGTGTACAA-3′
MCS2-N Primer(834-853):5′-TTGTACACGGCCGCATAATC-3′
T7 terminator Primer(1093-1111):5′-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′
使用说明：
1．首次使用1μg包装的本产品时，请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2．100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl，共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3．pET-Dual-N-GST-PreScission质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因，构建的质粒可以用常规方法转入表达菌株。
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在共表达两个蛋白的复合物时，通常宜把较难表达的基因克隆到第一个多克隆位点，宜把较易表达的基因克隆到第二个多克隆位点。这样通过GST柱纯化，可分离纯化获得带有GST标签的蛋白复合物。本质粒的N端GST标签与第一个多克隆位点之间有PreScission蛋白酶识别的八肽序列LEVLFQGP，对应核酸序列为CTGGAAGTTCTGTTCCAGGGGCCC，配合使用我司生产的PreScission Protease(货号：YT982)4℃酶切过夜，第二天收集穿柱液即可获得蛋白复合物，这为后续进行蛋白复合物的功能检测、蛋白结晶等工作带来了极大的便利。PreScission蛋白酶酶切发生在八肽序列的Q和G之间，因此在酶切去除GST标签的时候会在目的蛋白的N端留下两个额外的氨基酸残基GP。当然，本质粒也可以只在第一个多克隆位点插入目的基因，这样就会仅表达一个含有N端GST标签和PreScission识别位点的目的蛋白。
pET-Dual-N-GST-PreScission质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| T7 transcription start-1 | 1 |
| GST-taq coding sequence | 71-727 |
| PreScission Protease recognation site sequence | 728-751 |
| Multiple cloning sites-1(BamH I – NotI) | 752-802 |
| T7 promoter-2 | 859-875 |
| T7 transcription start-2 | 876 |
| Multiple cloing sites-2(Nde I – XhoI) | 943-1004 |
| S Tag coding sequence | 1011-1055 |
| T7 terminator | 1107-1154 |
| f1 origin | 1192-1639 |
| bla(Ap)coding sequence | 1764-2621 |
| pBR322 origin | 3382 |
| lacI coding sequence | 4576-5658 |
| T7 promoter-1 | 6049-6065 |
pET-Dual-N-GST-PreScission质粒(6065bp)的图谱如下：
pET-Dual-N-GST质粒中推荐使用的测序引物序列如下：
MCS1-N Primer(626-647):5′-GCTATCCCACAAATTGATAAGT-3′
MCS1-C Primer(853-834):5′-GATTATGCGGCCGTGTACAA-3′
MCS2-N Primer(834-853):5′-TTGTACACGGCCGCATAATC-3′
T7 terminator Primer(1093-1111):5′-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′
使用说明：
1．首次使用1μg包装的本产品时，请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2．100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl，共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3．pET-Dual-N-GST-PreScission质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因，构建的质粒可以用常规方法转入表达菌株。
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